48T淀粉去分支酶(DBE)试剂盒微板法
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产品详细介绍
淀粉去分支酶(DBE)试剂盒微板法
本试剂盒仅供科研使用
淀粉脱分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）试剂盒说明书
（货号：WS0450W微板法48样）
一、产品简介：
淀粉去分支酶(DBE)（EC 3.2.1.68）属于淀粉水解酶家族，特异性地水解支链淀粉的
α-1，6糖苷键，产生线性的葡萄糖链，在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。
采用3，5-二硝基水杨酸法测定DBE催化支链淀粉产生的还原糖，通过测定还原糖
含量的变化来得到DBE酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体60mL×1
瓶
4℃保存
试剂一
液体30mL×1
瓶
4℃保存
试剂二
粉剂mg×1瓶
4℃保存
临用甩几下，使试剂落入底部，再加
24mL试剂一，于80℃水浴锅中溶解呈透
明状态，待冷却后使用。
试剂三
液体30mL×1
瓶
4℃保存
试剂四
液体12mL×1
瓶
4℃保存
标准品
粉剂mg×1支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96孔板、可调式移液器、水浴锅、台式离心机、研钵、冰、蒸馏水
四、淀粉脱分支酶（DBE）活性检测：
建议正式实验选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称取约0.1g组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心10min，取
上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取
2、上机检测：
1
酶标仪预热30min以上，调节波长到540 nm。
2
在EP管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
20
20
（95℃煮沸10min的酶液）
试剂二
200
200
37℃孵育30min
试剂三
280
280
试剂四
100
100
混匀，95℃显色10min后，流水冷却至室温后，取出200μL至96
孔板中，于540nm处读取吸光值A，ΔA＝A测定-A对照。
【注】若ΔA 差值较小，可加大样本量，或延长孵育时间至 1 小时或更长。本试剂盒仅供科研使用
2
则改变后的加样量 V1 或反应时间 T 需重新代入公式计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 2.5359x - 0.0196，x是标准品质量（mg），y是ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克组织蛋白每小时水解支链淀粉产生1mg还原糖（以麦芽糖计）定义为
一个酶活力单位。
DBE活力(mg/h/mg prot)=[ (ΔA+0.0196)÷2.5359]÷(V1×Cpr)÷T
=39.43× (ΔA+0.0196) ÷Cpr
3、按样本鲜重计算
酶活定义：每克组织每小时水解支链淀粉产生1mg还原糖（以麦芽糖计）定义为一个酶
活力单位。
DBE活力(mg /h/g鲜重)=[ (ΔA+0.0196)÷2.5359]÷(W×V1÷V)÷T
=39.43× (ΔA+0.0196) ÷W
V－－－－加入提取液体积，1 mL；
V1－－－－反应中样品体积，20μL=0.02mL；
W－－－－样品质量，g；
T－－－－反应时间，30min=0.5h；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的BCA蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1制备标准品母液（50mg/mL）：临用加1mL蒸馏水，充分溶解混匀。
2把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0,5,10,15,20, 25mg/mL。也可根据实际样本来
调整标准品浓度。
3按照测定管加样体系操作，依据结果即可制作标准曲线。
